引言

　　日常液相色谱分析实验中，色谱柱的活化是保证实验顺利的关键步骤之一。不正确的活化方式可能造成柱效下降、固定相流失以及基线不稳定等负面情况，影响分析结果的可靠性，还直接关系到色谱柱的寿命和仪器的使用性能。本期我们将利用赛分科技不同分离模式的色谱柱，为大家分享一些关于液相色谱柱活化方面的技巧，帮助大家获得稳定可靠的分析结果。

SEC色谱柱

　　活化方法

　　对于SEC色谱柱，我们推荐采用流动相以低流速冲洗色谱柱约10-20倍柱体积，再逐渐升高至预计的操作流速。

　　如果流动相中有机相比例超过20%，建议先用纯水以低流速冲洗2-5倍柱体积，再进行转换，以避免盐析出。若选择粘度/背压更高的溶剂，如IPA，EtOH，则需要采用更低的流速。

　　流速的选择通常与色谱柱尺寸规格和填料粒径大小有关。一般来说，为确保最佳分离效果，色谱柱粒径越小，活化时使用的流速会越低。同时，在线速度相同的情况下，色谱柱活化时使用的流速和色谱柱内径呈正相关，即内径越大，流速越高。因此，在确定活化参数时，流速的设置也非常重要。

表1.不同规格SEC柱活化参数

　　表1列举了不同规格SEC柱活化的推荐流速，以供参考。在操作时，建议采用常规使用流速的1/5作为起始流速，每隔两到三分钟增加1/5流速。每次增加流速后，监测其基线和压力，待稳定几分钟后，再逐渐提高流速。若加入如IPA等有机溶剂，流速增幅需要适当减小。

　　注意事项

　　1对于水相使用，用流动相冲洗色谱柱，同时逐渐将流速增加到操作流速，使色谱柱压力平衡，并且基线稳定。

　　2如果使用超过20%有机溶剂作为流动相，推荐在平衡时，采用低流速或者让流动相在色谱柱中过夜保存。

表2.赛分科技SEC色谱柱部分展示

IEX色谱柱

　　活化方法

　　推荐用10-20倍柱体积的流动相进行冲洗以活化色谱柱。流速由0.1mL/min逐渐升至实验所需条件，直至基线稳定为止。

　　如果柱压和基线波动较大，可能是气泡进入了色谱柱中。这时需要断开色谱柱，用较高流速冲洗2-5min，例如4.6×250mm的色谱柱可采用1.0mL/min流速。

　　如果流动相的类型或pH与色谱柱中缓冲液的pH值差异较大，建议将色谱柱先用新的流动相冲洗10倍柱体积。

表3.赛分科技IEX色谱柱部分展示