引言

　　随着重组胶原蛋白赛道的持续火爆，作为最常用的亲和标签，His标签在重组胶原蛋白研发生产中的应用可谓举足轻重。基于组氨酸残基与金属离子（如Ni2+、Cu2+、Zn2+等）之间的螯合作用，固定化金属亲和层析（immobilized metal-ion affinity chromatography，IMAC）技术已成为 His 标记蛋白分离纯化的首选方法。为应对His标签蛋白纯化的需求，赛分科技推荐两款琼脂糖基质的镍亲和填料Agarosix MC90-NTA Ni和Agarosix MC90-Ni Excel，具有非特异性吸附低、结合载量高和耐受性强等优势，可大大提升纯化过程的效率和质量。

产品介绍

　　常用的His标签融合蛋白纯化的填料有Ni-IDA、Ni-NTA（图1左）和Ni-TED（图1右）等金属螯合亲和填料。由于镍离子（Ni2+）一共有6个配位点可以进行螯合配位，镍离子与填料基质螯合的配位数决定了填料的性能差异，实际生产中需要根据纯化要求选择合适的填料。

图1. Ni-NTA和Ni-TED填料结构示意图

　　Agarosix MC90-NTA Ni和Agarosix MC90-Ni Excel是两款以6%高交联度琼脂糖为基质的金属亲和层析填料，填料表面具有高度亲水性，最大程度地避免了与生物类样品的非特异性吸附。Agarosix MC90-NTA Ni填料以次氮基三乙酸（NTA）为配体螯合镍离子，His标签蛋白的载量高于50 mg/mL，可耐受0.1 M NaOH清洗再生。Agarosix MC90-Ni Excel填料以三羧甲基乙二胺（TED）为配体螯合镍离子，5个螯合位点使得其对于镍离子具有很强的约束力，该填料可重复使用，无需补充镍离子，可有效缩短纯化工艺。详细技术参数可见表1。

表1. Agarosix MC90-NTA Ni和Agarosix MC90-Ni Excel的技术参数

性能特点

　　1. 耐压优势

　　对Agarosix MC90-Ni Excel进行压力测试，如图2结果显示，常规线速度下（200-400 cm/h），在几种常用的流动相中填料压力表现良好，在0.6 bar左右。较高比例的有机相会导致压力较高，20%乙醇保存时需留意流速对填料压力的影响。

图2. Agarosix MC90-Ni Excel压力测试结果

　　2. EDTA耐受性

　　在100 mM EDTA条件下泡碱1 h， Agarosix MC90-Ni Excel的DBC为初始值的67.98%，竞品Ni Excel下降至42.06%；相较而言，Agarosix MC90-Ni Excel具有更好的EDTA耐受性。

图3. Agarosix MC90-Ni Excel对EDTA的耐受性测试

　　3. 耐碱性能

　　Agarosix MC90-Ni Excel与竞品耐碱性能测试观察DBC变化（具体数据见图4），泡碱条件为1 M NaOH。泡碱测试模拟填料寿命实验，一般CIP条件0.5 M碱洗5-6 CV，约30 min，泡碱48 h相当于96次纯化实验CIP。Agarosix MC90-Ni Excel可保持在初始载量的80%左右，整体耐碱性能优良。

　　图4. Agarosix MC90-Ni Excel耐碱性能测试

　　应用案例

　　某His标签蛋白样品纯化实验方案

　　层析柱信息：Agarosix MC90-Ni Excel（6.6*200 mm，CV=6.842 mL）

　　检   测   器：UV 280 nm      

　　样         品：某His标签蛋白发酵液

　　上   样   量：40 mg/mL填料

图5. Agarosix MC90-Ni Excel纯化图谱和电泳图

（1.Marker; 2.原样; 3.流穿; 4.后平衡; 5.柱冲洗; 6.洗脱）

　　Agarosix MC90-Ni Excel纯化His标签蛋白发酵液，样品洗脱集中，无明显拖尾，回收率为86.67%；从纯化后样品的电泳图（图5）分析可知，Agarosix MC90-Ni Excel洗脱后蛋白纯度较高，纯化效果较好。

小结

　　Agarosix MC90-NTA Ni填料的蛋白载量高，耐酸耐碱，可耐受0.1 M NaOH清洗再生。适用于原核蛋白表达料液中不含EDTA、DTT等还原剂或螯合剂——重组蛋白、酶、生长激素类。

　　Agarosix MC90-Ni Excel填料具有优异的DTT和EDTA耐受性，可重复使用100 次以上，每次使用后可以直接用0.5 M NaOH溶液在线清洗，无需补充镍离子，且耐碱性能较好，使用寿命较长，可缩短纯化工艺，有效降低成本。适用于真核体系表达料液中含EDTA、DTT等还原剂或螯合剂——重组蛋白、酶、生长激素类。

订购信息

注：包装规格为1L，5 L, 10 L, 50 L，预装柱规格为1mL, 4.2mL, 5 mL。