今年4月3日，中国ADC药物研发公司普方生物以18亿美元（约合130亿元人民币）被丹麦生物技术公司Genmab收购，再一次引发业内对ADC药物的关注。2023年ADC药物市场爆发，年总销售额破百亿美元，其中5款药物跻身10亿美元俱乐部，进一步展现出ADC药物市场的火热。相比于小分子细胞毒药物，ADC具有更高的安全性和有效性，在提出“魔法子弹”的理念后，2000年第一款ADC药物（Gemtuzumab ozogamicin）上市，至今全球已有15款药物进入市场。ADC的研究已然成为近几年最火热的药物研究领域之一，百余款ADC药物处于临床研究阶段，其中据不完全统计国内已有超过17个项目处于临床后期（表1），预计未来3-5年进入收获期。ADC药物市场份额增长迅速，预计到2030年，全球市场将超600亿美元（预估信息来自Frost & Sullivan）。

表1. 国内处于临床后期的ADC项目梳理

数据来源：药融云数据库

　　抗体偶联药物（Antibody Drug Conjugate，ADC）研发的火热得益于技术的不断升级，发展至今ADC药物历经三代技术的革新，可以开发出更有效、安全而稳定的药物分子，在药效提升的同时降低药物副作用。ADC药物的结构（见图1）有三个主要关键组成部分：抗体（Antibody）、连接子（Linker）、毒素分子（Payload）。理想的ADC分子应当具有高靶向性，精准结合目标靶点，毒素分子可以从血浆中稳定通过并到达目的地（例如，癌细胞）再释放，发挥毒素分子的作用。因而这三个组成部分对药物使用效果都有至关重要的影响：抗体的靶点选择、特异性、亲和力、内化效率，可降解连接子的稳定性、不可降解连接子与小分子毒素复合物对肿瘤细胞的杀伤力、连接子与抗体的偶联方式，以及小分子毒素的选择是ADC药物开发过程中需要主要考量点。

图1. ADC药物结构示意图

　　随着抗体制备技术和偶联技术的不断进步，现阶段的ADC候选药物已经克服了一系列问题，如药物靶向性不足、药物毒性大、异质性高、连接子不稳定等。此外，药物抗体比（drug-antibody ratio，DAR）大于4的ADC存在耐受性低、体内疗效低以及血浆清除率高的问题，因此优化偶联技术，控制DAR值是目前ADC药物研究的重要方向，而位点特异性偶联（site-specific conjugation）技术是解决ADC药物关键质量属性DAR的关键。经过三代技术的革新，位点特异性偶联技术逐渐成熟，表1中总结常见集中偶联方式及其特点。此外，偶联技术整体决定可能引入的工艺相关杂质，因而偶联技术的选择与下游纯化方案息息相关，根据不同的偶联方式可推测出偶联后采用的纯化方案（表2）。

表2. 常见ADC药物偶联方式及其特点

　　常见的ADC药物生产流程及纯化工艺，根据其偶联技术及引入的杂质情况可归纳为三类，分别是无需色谱层析，常规采用UF/DF结合TFF系统使用；其二，偶联工艺中引入酶作为偶联试剂，常采用亲和加阳离子交换纯化；其三，偶联反应中因为条件变化可能导致ADC聚集，减少聚集体或其他产品相关杂质，常采用阳离子交换层析。结合不同的杂质类型推荐对应的去除策略，采用不同的层析方式，将其总结为下表（表3），文末可填写问卷信息申请试用。

表3. 偶联反应常见引入杂质及去除方法

　　ADC药物由抗体与小分子毒素偶联，其基本生产流程见图2，已上市ADC药物中均以单抗作为ADC靶向偶联抗体，毒素分子主要为细胞毒药物（已上市药物主要有微管抑制剂、DNA损伤剂为主），具有强细胞毒性，进入体内如果发生脱靶（off-target）对正常细胞有较高损伤，因而需要保证ADC药物中游离细胞毒分子控制在很低水平且保证ADC较小的脱靶情况，尽可能减小药物的毒副作用。下游纯化是保证药物质量的重要方式，对于不同的偶联方式以及产生的对应杂质，需配合合理的纯化工艺以保证终产品的质量。

图2. ADC药物生产及纯化流程

　　赛分科技推荐对于引入酶的偶联方式采用MabPurix系列亲和层析配合Monomix Mab60-SP阳离子交换的方式进行纯化；对于需去除ADC样品中的聚集体、片段以及电荷异质性杂质采用阳离子交换层析（Monomix Mab60-SP），可实现高效纯化。另一方面如需控制裸抗含量或者去除DAR值的样品可尝试采用疏水层析。

ADC药物偶联后纯化填料简介

　　Monomix MC30-HIC Butyl疏水层析填料

　　ADC偶联后存在不同DAR值样品具有疏水性差异，理论上可选择疏水层析介质用于纯化不同DAR样品。实际操作中，疏水层析填料需要极高的分辨率（小粒径填料）才能保证分离不同的DAR值的样品。下表为Monomix MC30-HIC Butyl疏水层析填料技术参数，可用于富集目标DAR值ADC样品。

　　介质特点

　　高机械稳定性，良好的耐压性能

　　适中的疏水性

　　高化学稳定性，可耐受pH 2-13

　　高分辨率、高回收率

表4. Monomix MC30-HIC Butyl疏水层析填料技术参数

　　Monomix Mab60-SP离子交换填料

　　Monomix Mab60-SP为强阳离子交换填料，具有高分辨率、高载量，对于ADC药物中裸抗以及偶联后药物的纯化均应用广泛，下表为Monomix Mab60-SP填料的技术参数。将填料保存于DMSO溶剂中一周后再测试其DBC，结果显示无显著变化（100.2%），该填料对DMSO表现出有良好的溶剂耐受性。

　　介质特点

　　高结合载量和极好的生物相容性

　　刚性基质可耐受高压和高流速

　　高分辨率、高柱效和高回收率

　　易于放大

　　高度亲水性表面，可忽略的非特异性吸附

　　常规装柱条件下，体积变化小

表5. Monomix Mab60-SP离子交换填料技术参数

　　MabPurix A65 Excel亲和层析填料

　　裸抗与毒素分子偶联方案中采用酶的情况下，多采用亲和+离子交换的方法纯化ADC药物。MabPurix A65 Excel具有高载量、高回收率，对于单抗、双抗以及ADC样品具有良好的纯化效果，表6为该填料产品技术参数。

　　介质特点

　　高载量,其中A65 Excel动态载量高达70 mg hlgG/mL resin

　　低Protein A脱落，高HCP去除效率

　　高交联度，耐压达0.3 MPa

　　有效去除聚集体，降低后续纯化压力

　　填料反压低，易于放大

表6. MabPurix A65 Excel亲和填料技术参数

　　*参考文献：

　　[1] Matsuda Y. Current approaches for the purification of antibody–drug conjugates. J Sep Sci. 2022;45:27–37. 

　　[2] Fu Z, et al. Antibody drug conjugate: the"biological missile"for targeted cancer therapy. Signal Transduction and Targeted Therapy, 2022(004):007.

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　　如需以上填料，填写问卷信息可申请试用装测试，并可参与满意度反馈问卷抽奖活动。

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