引言
多药联合制剂，是指在单一剂型中融合了两种及以上不同药物成分的创新模式。与单一药物制剂不同，多药联合制剂通过各药物间的协同效应，在治疗途径中实现更高的疗效。但与此同时，这种复合制剂也会导致药物间异质性相互作用，产生疗效未知和免疫原性不确定的特殊杂质，为药物安全性和有效性带来了新的挑战。因此，探索并建立一套科学合理的评估体系，用以筛查由制剂引发的抗体异构体现象，显得尤为关键。
为解决这一问题，2024年初，再生元公司采用赛分科技Zenix SEC-300色谱柱，开发出混合模式体积排阻色谱(MM-SEC)分析方法，在异二聚体与总二聚体(同型与异型混合)的分离纯化中具有独特优势。与其他分离模式相比，MM-SEC可以实现基线分离，异二聚体纯度为67%，满足分离纯化要求(点击文末阅读原文查询相关文章)。该方法在疫苗研发、药物筛选评估等方面具有重大意义。
背景介绍
在生物制药领域，再生元公司推出的卡西利维单抗和英德维单抗(Casirivimab＆imdevimab)作为典型的多药联合制剂药物，可以通过结合病毒表面的三聚体刺突蛋白(S蛋白)，激活免疫系统，发挥至关重要的作用。这两种抗体以1:1比例与IgG1抗体混合，形成了表位结合均衡的治疗方案。
然而，多药联合制剂中产生的抗体异二聚体，其物理属性与抗体药物制品中原生存在的同源二聚体高度相似，这一特性为目标物质的精准分离和纯化带来了巨大挑战。赛分科技Zenix SEC-300色谱柱，其特有的表面修饰技术和优异的分离性能，在保持高分辨率的同时可以实现异二聚体的基线分离和富集，确保最终产品满足预期。
文章概述
对于多药联合制剂，其挑战在于如何高效地从大量的单体和同源二聚体中提取出少量但至关重要的异二聚体。传统的色谱分离模式各有优势，但单独使用时可能无法达到理想的分离效果。因此，结合体积排阻色谱(Size Exclusion Chromatography, SEC)和疏水相互作用色谱(Hydrophobic Interaction Chromatography, HIC)技术特点的混合模式色谱(MM-SEC，后文简称MMC)应运而生，成为解决这一难题的理想方案。
研究人员通过采用赛分科技Zenix SEC色谱柱开发的MMC技术，有效实现了目标产品中异二聚体的分离与富集，为中和抗体治疗方法的质量控制提供了有力支持，开辟了新的分离纯化途径。
聚体富集
色谱柱：Zenix SEC-300(7.8×300mm,3μm,300Å)
流动相：20mM磷酸钠，10mM醋酸钠，300mM硫酸钠，150mM氯化钠
流速：0.25mL/min
紫外检测波长：UV280nm和UV215nm
进样量：10μg
整合色谱图以确定每个峰的相对丰度，结果如下：
图1.中和抗体二聚体SEC富集结果
图1是将异源二聚体从痕量(＜0.05%)富集到＞55%纯度的过程。如图1所示，MMC模式下总二聚体样品被分成4个特定的二聚体峰，根据不同疏水性，可实现基线分离。不同洗脱峰主要对应于casirivimab同源二聚体、imdevimab同源二聚体及位于两者之间的异二聚体。经SEC分离纯化后，异二聚体的纯度提高至约67%，显示出MMC技术在抗体异二聚体富集上的显著成效。
图2.富集组分稳定性数据
图2是每个样品第0和第14天的稳定性数据。富集的总二聚体和异二聚体在37℃下培育，并进行MMC-UPLC分析。数据表明，随着时间的推移，富集的组分倾向于解离成相应的单体单抗。进一步研究表明，这部分主要是两种单抗样品的同型二聚体，异二聚体的稳定性与单个药物成分中的同型二聚体类似。
实验结论
综上所述，在高盐条件下，Zenix色谱柱能够从总二聚体中分离异源二聚体。该实验为中和抗体治疗方法的质量控制提供了有力支持，不仅为进一步了解抗体间的相互作用和结构特性创造有利条件，也为整个生物制药行业在复杂蛋白制品的纯化和分析方面开辟了新的途径。
产品介绍
赛分科技SEC系列色谱柱，采用特有的表面修饰技术，分离速度快，分辨率高，通用性好，批次重现性强，适用于质控QC放行，也是分析型SEC值得信赖的产品。
图3.赛分科技SEC固定相表面修饰工艺
“-C”系列产品，采用赛分科技独有的固定相修饰工艺（见图2），硅胶表面键合一层“平躺”的单分子层，最大程度减少非特异性相互作用。“-C”系列产品适用于疏水性较强的样品，可以减少有机相的使用，安全、环保，让您的实验无后顾之忧。
延展阅读
体积排阻色谱法适用于从小规模实验室研究到大规模工业生产的广泛需求。赛分科技SEC系列产品具有柱容量大、操作简单、易于自动化的特点，能够稳定、连续地处理大量样品，满足治疗性蛋白在疫苗研制、临床试验乃至商业化生产中的高通量需求。
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