引言
CircRNA具有生产成本低、稳定性好、蛋白表达水平高的优势，同时也对核酸外切酶降解具有高抗性，在免疫细胞治疗领域具有重要的应用潜力。T细胞受体（TCR）工程T细胞（TCR-T）是治疗病毒感染和癌症的一种很有前途的手段,与传统CAR-T相比，抗原识别范围更广。这种类型的治疗方法在抗病毒与抗肿瘤免疫治疗领域具有广泛的应用前景。
近日，赛分科技客户上海交通大学医学院附属第一人民医院/上海市第一人民医院联合苏州科锐迈德生物医药科技公司在国际学术期刊《Molecular Therapy》在线发表了关于circRNA的研究论文（点击文末阅读原文可查询相关文章）。该研究首次报道了基于circRNA技术的TCR-T细胞疗法，为临床上造血干细胞移植后人巨细胞病毒（CMV）感染提供新的、更为安全有效的免疫治疗策略。研究人员使用赛分科技产品SRT SEC-1000（30×300mm）体积排阻色谱柱对circRNA进行纯化处理，收率可超过99%，回收后纯度高达96%，这种纯度水平在TCR-T细胞工程的转染过程中至关重要。
背景介绍
CircRNA细胞定位准确，调节基因表达能力强，在疫苗和药物研发领域备受关注。其制备过程中产生的线性RNA杂质可能激发强烈的免疫反应，因此有效去除线性RNA杂质、制备高纯度circRNA是开展体内外实验的必要条件。
体积排阻色谱法（SEC-HPLC）是circRNA纯化的有效方式。其优点是容易去除差异较大的RNA片段，比如内含子片段。将SEC-HPLC与RNase R酶消化法相结合，可以扩大circRNA、开环circRNA、线性RNA前体等产物的特性差异，且更具放大潜力，是circRNA大批量纯化的首选方案。
文章概述
文章选用赛分科技SRT SEC-1000（30×300mm）体积排阻色谱柱，通过SEC-HPLC与RNase R酶消化法相结合的方式，制备得到纯度高达96%的circRNA，可以满足对于circRNA纯度及收率的要求，在mRNA疫苗的开发和核酸药物治疗方面潜力巨大。
circRNA纯化
色谱柱：SRT SEC-1000 (30×300mm,5 μm,1000Å)
流动相：无RNase磷酸盐缓冲液(pH 6.0)
流速：15 mL/min
通过峰捕获和浓缩收集高纯度的circRNA， 超离心后用无RNase的水代替缓冲液
图1.GFP标记circRNA表达和纯化
图1显示了GFP标记的circRNA表达和纯化程度。研究人员对目标为1.9Kb的circRNA进行纯化处理，与未纯化的circRNA（76.8%）相比，采用SRT SEC-1000（30×300mm）体积排阻色谱柱纯化后的纯度可达96.0%，收率可达99.0%。
图2.编码PP65特异性TCR的circRNA纯化图谱
图2总结了使用SRT SEC-1000（30×300mm）体积排阻色谱柱时编码PP65特异性TCR的circRNA的纯度，经过纯化后,纯度从58.1%提升为96.6%，收率为98.2%，满足实验要求，可用于进一步的体内/体外验证。
实验结论
文章通过使用SRT SEC-1000（30×300mm）体积排阻色谱柱，满足了circRNA的纯化制备要求。这种纯化方式与新型TCR-T载体相结合，会获得更安全有效的细胞转染和蛋白表达，可广泛用于未来治疗领域。
延展阅读
赛分科技大孔径色谱柱已广泛应用于mRNA、circRNA的分析以及高纯度样本制备，可以提供药物研发、临床前、临床、大规模生产的制备柱。赛分科技国内外客户均有采用体积排阻色谱柱用于mRNA样品分析及制备，并发表相关研究文献，部分摘录文献可再次浏览。
链接：点击以下文章再次阅读，通过SEC分析、制备mRNA样品：
《文献速递 | 抗SARS-CoV-2和新变异株的环状RNA疫苗》
《文献速递 | 美国药典委员会发布mRNA疫苗质量分析方案》
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