去年11月，礼来开发的双靶点激动剂药物替尔泊肽（Tirzepatide）减重适应症在美国获批，立刻引爆市场。作为第一款获批减肥适应症的双靶点GLP-1药物具有更优于司美格鲁肽的临床效果，在获批后带来单季度超14亿美元的业绩，今年用于2型糖尿病药物Mounjaro与肥胖药物Zepbound合计23.24亿美元。替尔泊肽的火热进一步带动研究者对于双靶点/三靶点GLP-1药物的研发，国内多靶点GLP-1多肽药物研发进展见表1。

表1. 国内多靶点GLP-1药物研究进度

*数据来源：公司官网、数据库检索

　　替尔泊肽是GLP-1R以及GIPR双靶点药物，兼具GLP-1R受体和GIPR受体激动活性，且结构设计中避开二肽基肽酶Ⅳ（DPP-4）降解活性位点。其多肽链（结构示意图见图1）存在两个非天然存在的氨基酸，位于2和13位的非编码氨基异丁酸残基，另外在20位氨基酸残基处引入长链脂肪酸，进一步延长药物半衰期。由于其结构的特殊性，一般采用化学合成的方式生产。化学合成一般分为固相合成（SPPS）和液相合成（LPPS），两种合成工艺各有优缺点，对于长链多肽药物采用固液混合合成（SPPS+LPPS）的方式很大程度上降低工艺难度，提高产品收率，对于下游纯化更加友好。

图1. 替尔泊肽多肽链结构示意图

01

替尔泊肽反相纯化方案

　　赛分科技采用一步反相或两步反相纯化方案用于替尔泊肽样品的纯化工艺开发。采用的纯化填料产品为Bio-C8(2)，粒径10 μm，纯化工艺简单，采用不含盐流动相，醋酸水+乙腈体系作为流动相，纯化目的样品，减少后续脱盐步骤，图2为其纯化图谱。

图2. 粗品纯化图谱

　　纯化后对洗脱收集样品合并分析，满足高载量（26.8 mg/g）的同时，一步反相纯化将粗品纯度为80.78%的样品提升至99.03%，且最大单杂小于0.3%，纯化前后样品分析图谱见图3，收率为80.04%。

图3. 替尔泊肽样品纯化前后纯度分析图

　　此外，对于存在特别难去除的杂质或者样品纯度相对较低的情况，采用同一款填料两步反相层析解决纯化问题。图4为第二步反相纯化图谱，同样采用Bio-C8(2)硅胶反相填料，载量为1.72%，对比第一步反相纯化对杂质类型的去除各有侧重，有效提高样品纯度，对纯化图谱分段收集样品进行分析。

图4. 第二步反相纯化图谱

图5. 第二步反相纯化后样品纯度分析

　　第二步反相纯化进一步去除杂质，通过对流动相条件的调整实现目标纯度达99.80%，最大单杂小于0.1%（分析图谱见图5）。纯化方案中可以通过加入不同缓冲盐种类调整对于关键杂质的去除效果，保证最终产品的质量符合要求。表2为案例中纯化工艺的具体数据分析。且两步纯化工艺均保持高回收率，两步反相纯化后总收率可达74.35%。

表2. 两步反相纯化替尔泊肽工艺数据分析

02

替尔泊肽反相纯化工艺小结

　　01.Bio-C8(2)反相填料分辨率高，一步反相纯化粗品替尔泊肽纯度可达99%，最大单杂可控制在0.3%以下；

　　02.Bio-C8(2)反相填料纯化载量高、回收率高，每一步骤的纯化收率都大于80%，保障终产品收率，适合放大生产；

　　03.同一款填料可用于两步反相纯化，通过调整流动相条件去除不同杂质，满足最终质量要求。

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　　赛分科技对该类药物的生产工艺进行探索，针对发酵生产和化学合成的司美格鲁肽开发出纯化效率高、通用性强的纯化工艺。对于发酵类GLP-1多肽样品仅使用两款填料（Generik MC60-HIC Butyl+Bio-C8(2)）即可完成粗品到成品的纯化。欢迎点击阅读“省时省力又省钱的GLP-1药物纯化方案”。

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