蛋白A（Protein A）是从金黄色葡萄球菌细胞壁上分离的膜蛋白，分子量约42 kDa，其野生型包含五个同源结构域（E、D、A、B、C），每个结构域均由三个反向平行的α螺旋（Helix1-3）和两个柔性连接臂（Loop1-2）构成，该结构域能够与人免疫球蛋白IgG的Fc片段发生高亲和力结合。基于这一特性，将蛋白A固定于层析填料微球上，由此开发的蛋白A亲和层析技术已成为抗体蛋白纯化中广泛使用的关键方法。

图1. 蛋白A序列结构示意图*

蛋白A亲和层析在抗体捕获步骤中，能高效去除培养基成分、宿主细胞蛋白（HCP）、宿主细胞DNA（HCD）、色素等工艺相关杂质，以及部分抗体片段和聚集体等产品相关杂质。然而，该过程中存在的配基脱落问题会引入蛋白A自身，成为影响药品安全性的潜在风险，因此法规严格要求药品中蛋白A残留必须低于10 ppm。

研究发现，蛋白A的脱落主要有两种机制*：

　　完整分子脱落：其主要来源一是与层析介质基球非共价结合的蛋白A，在纯化过程中与IgG结合并被一同洗脱；二是介质因物理损伤导致蛋白A直接脱落。

　　片段脱落：其关键机制在于上样时，细胞培养收获液（HCCF）中含有的蛋白酶（特别是金属蛋白酶）会降解固定化的蛋白A配基，从而产生蛋白A片段。这些片段在流穿液和洗脱液中均检测出现。片段分子量范围广泛（6-40 kDa），不同HCCF来源的片段模式有差异但存在共性。

因此，在抗体下游纯化过程中，有效清除残留的蛋白A配基是后续精纯步骤中的关键挑战。赛分科技凭借深厚的抗体纯化工艺经验，推荐阳离子交换填料Monomix Mab60-SP与复合阴离子交换填料Agarosix MC75-MMA，两者均表现出优异的蛋白A去除能力，为抗体药物的工艺开发提供稳定、可靠的解决方案。

阳离子交换层析

Monomix Mab60-SP离子交换填料以亲水性聚甲基丙烯酸酯为基质，粒径为60 μm，具有高分辨率，能有效分离蛋白A残基、聚体、片段等杂质，在双抗项目上表现出良好的耐盐性，广泛适用于抗体、重组蛋白等生物样品的下游纯化。

纯化案例

样品信息：某单抗样品，上样载量：40 mg/mL

复合阴离子交换层析

Agarosix MC75-MMA复合阴离子交换填料以粒径75 μm的 6%交联度琼脂糖凝胶为基质，具有高度的生物相容性和物理化学稳定性且同时具有疏水及阴离子交换性能，可广泛适用于抗体、蛋白、核酸等生物样品的分离和纯化。在抗体纯化工艺中，阴离子交换通常作为亲和层析后的第一步精纯过程。Agarosix MC75-MMA复合阴离子交换填料尤其适用于AC Pool聚体含量较高的情况，对HCP、DNA、Pro A及聚集体均有较好的去除效果。

纯化案例

样品信息：某单抗样品，上样载量：200 mg/mL

订购信息

注：包装规格为1 L，5 L, 10 L, 50 L，预装柱规格为1 mL, 4.2 mL, 5 mL

*参考文献：

[1] Hober S, Nord K, Linhult M. Protein A chromatography for antibody purification. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2007 Mar 15;848(1):40-7. doi: 10.1016/j.jchromb.2006.09.030. Epub 2006 Oct 9.

[2] Carter-Franklin JN, Victa C, McDonald P, Fahrner R. Fragments of protein A eluted during protein A affinity chromatography. J Chromatogr A. 2007 Sep 7;1163(1-2):105-11. doi: 10.1016/j.chroma.2007.06.012. Epub 2007 Jun 12.