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文献速递 | AAV样品中聚体和游离DNA的分析

发布时间:2022-03-18浏览次数: 赛分新闻

   近日,赛分(美国)科技有限公司的国际合作伙伴美国REGENXBIO公司的研究人员在《Journal of Pharmaceutical Sciences》杂志上发表了题为《Impact of Time Out of Intended Storage and Freeze-thaw Rates on the Stability of Adeno-associated Virus 8 and 9》的文章*(点击底部左下角“阅读原文”获取文章链接),介绍了AAV腺病毒载体TOIS和冻融率的稳定性考察结果。文章中提到了赛分科技SRT SEC-1000色谱柱应用于分析AAV中游离DNA和聚体的应用案例。

背景介绍

  腺相关病毒(Adreno-Associated Virus, AAV)载体作为一种基因导入系统,具有安全性好,免疫原性低,能感染分裂细胞和非分裂细胞,能介导基因的长期稳定表达等优点,因此在神经系统的体内和体外研究中,受到越来越多的关注和重视。AAV在基因治疗方面的发展势头越来越大,越来越多的临床试验将其用于各种治疗。

文章概述

  腺相关病毒(Adreno-Associated Virus, AAV)是微小病毒科(Parvoviridae)家族的成员之一。近年越来越多研究AAV作为基因治疗的载体,AAV 载体包含一条长达 4.7 kb 的 ssDNA,包含在由 60 种单独蛋白质组成的二十面体衣壳中。

  AAV在制造和储存过程中的化学和物理降解会导致纯度降低和效力丧失。通过设计合理的处方,降低保存温度,可以减小AAV化学和物理产生的降解,AAV可长期贮存于-60℃条件下,短期可置于2~8℃冰箱中。在生产、标记和临床使用过程中会发生冻融 (Freeze-thaw,F/T)循环和暴露于室温和冷藏的情况,需要考察其F/T稳定性。

  生物技术新锐REGENXBIO公司,就超出预期储存时间(time out of intended storage,TOIS)和冻融率对AAV8和AAV9稳定性的影响进行深入的研究。研究人员设计三个不同处方,将低浓度和高浓度的 AAV8 和 AAV9 暴露在五个F/T循环中,在“daisy chain”中TOIS稳定性研究。考察不同配方下,样品的载体基因组浓度,SEC 峰前含量,DLS 的尺寸分布等指标考察TOIS和冻融率对药物制剂的影响。结果表明,AAV8 和 AAV9产品质量属性保持在可接受的范围内,二者具有适用于制造和临床操作的稳定性曲线,并具有额外的偏移量。

聚体及游离DNA检测

  聚体及游离DNA检测:文中提到使用粒径为5 μm,孔径为1000 Å的赛分科技SRT SEC-1000分析色谱柱,用于检测游离DNA以及聚体含量。从分析图谱中可以看到样品中的聚体和游离DNA可以实现很好的分离。

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  据了解,REGENXBIO公司多个AAV载体的项目,均采用赛分科技的SEC系列产品进行分析,并定入质量标准。之前的文献速递栏目中,介绍赛分科技客户赛诺菲在《Human Gene Therapy》发表检测AAV样品中全衣壳的方法,其中介绍使用SRT SEC-500作为检测色谱柱,用于确定空衣壳和完整衣壳相对量。

  * Bee JS, Zhang YZ, Phillippi MK, etc. J Pharm Sci. 2022 Jan 7:S0022-3549(22)00004-1. doi: 10.1016/j.xphs.2022.01.002.

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