脂质纳米颗粒（Lipid Nanoparticle，LNP）具有磷脂双分子层，因其特殊结构和稳定性常用作核酸药物载体，可以保护RNA分子不被体内酶分解，将其输送到体内特定部位。常见LNP直径在25~1000 nm不等，为测定其尺寸和分布常采用体积排阻色谱结合多角度光散射（Multi-Angle Laser Light Scattering，MALS）的方法，可快速测定将其分布情况和平均尺寸。

病毒载体是目前用于DNA递送的有效机制，对于基因疗法以及疫苗开发具有重要意义。近年来，已有病毒载体疫苗开发出来并应用病毒预防，包括细胞基因疗法采用病毒载体进行药物递送。全球对此类产品的需求在不断提升，该类产品的质量分析方法受到更多关注。

本文内容涵盖LNP及病毒载体分析案例、产品使用指南、文献分析方法等，欢迎查阅！

LNP及病毒载体分析与纯化产品推荐

病毒载体以AAV样品为例，样品组成中有空壳载体（Empty）、部分组装载体（Partially）、聚集体（Aggregates）等相关杂质，如图1所示，以上相关杂质带来安全风险。为保证安全和质量可控采用体积排阻、离子交换等方式进行质量控制。

图1. AAV产品相关杂质组成及风险

脂质体LNP

案例1. Monomix MC10 SEC色谱柱分析LNP-mRNA制剂样品

Column: Monomix MC10 SEC-300 (10 µm, 300 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 50 mM PB+500 mM NaCl, pH 7.0

Flow rate: 0.5 mL/min   

Column temperature: 25 °C   

Detection: UV 280 nm

Injection volume: 20 µL    

Sample: LNP-mRNA mixture

图2. Monomix MC10 SEC-300分析LNP样品图谱

Monomix MC10 SEC-300色谱柱能有效分离LNP-mRNA制剂样品中的LNP-mRNA、游离mRNA及ssDNA，可用于检测未包封组分。LNP尺寸分布分析可采用孔径较大体积排阻色谱柱，如Monomix MC10 SEC-3000。

腺相关病毒载体AAV

案例2. AAV SEC-5色谱柱分析AAV8样品聚集体

Column: AAV SEC-5 (5 µm, 4.6x300 mm)

Mobile phase: 1.8 x DPBS+10% Ethanol 

Flow rate: 0.35 mL/min   

Column temperature: 25 °C   

Detection: UV 260nm&280nm; FLD Excitation 280 nm, Emission 330 nm

Injection volume: 20 µL    

Sample: AAV8 full capsid

图3. AAV SEC-5分析AAV8实心衣壳颗粒图谱

案例3. Proteomix AAV SAX分析AAV8样品空壳率

Column: Proteomix AAV SAX-NP3 (3 µm, 4.6×50 mm)

Mobile phase: A: 20 mM BTP, pH 9.0

                       B: 20 mM BTP+500 mM TMAC, pH 9.0

Flow rate: 1.0 mL/min

Column temperature: 25°C 

Detection: UV 260&280 nm, MALS

Injection volume: 20 µL 

Sample: AAV8 (1.2921×1013 total particles/mL）

图4. Proteomix AAV SAX分析AAV8样品图谱

腺相关病毒（AAV）载体是一类无包膜、二十面体结构的微小病毒，直径约20 nm，基因组为一段长约4.7 kb的线状单链DNA，且自身无法自主复制。在AAV载体的生产过程中，需对其关键质量属性进行严格监控，以确保最终药物的安全性与有效性。AAV样品采用AAV SEC-5专用柱，可实现多聚体、单体及游离核酸的高分辨分离；针对空壳率分析，则可选用Proteomix AAV SAX专用柱，有效分离空壳和实心组分。

慢病毒载体LV

案例4. SRT SEC-1000色谱柱分析慢病毒样品

Column: SRT SEC-1000 (5 µm, 1000 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 100 mM PB+100 mM NaCl, pH 7.0

Flow rate: 0.8 mL/min  

Column temperature: 25 °C   

Detection: UV 260 nm

Injection volume: 5 µL    

Sample: 慢病毒样品(≈1 μg/mL, P24蛋白计)

图5. SRT SEC-1000分析慢病毒样品图谱

慢病毒（Lentivirus，LV）载体是在人类免疫缺陷病毒I型（HIV-1）基础上改造而来的基因治疗载体，与常规逆转录病毒载体不同，其对分裂细胞与非分裂细胞均具备感染能力。LV病毒尺寸约80-120 nm，对比AAV样品尺寸更大。采用更大孔径SRT SEC-1000色谱柱，可有效分析慢病毒样品中的聚集体、单体和总病毒衣壳颗粒。

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产品使用指南

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核酸样品分析方案推荐

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