自21世纪,生物技术进入高速发展期,开发出结构更加复杂、表达量更高的生物大分子样品。随之而来对生物药物的制备技术及工艺提出挑战,层析技术具有优异的分离效果、温和的色谱条件对生物大分子十分友好,可以保证生物样品活性,是目前下游纯化的首选方法。离子交换层析技术可用于抗体、VLP、蛋白、mRNA、质粒、多肽等生物大分子的纯化,在样品粗纯、中纯以及精制中应用广泛,在四大层析技术中占据重要地位。
赛分科技专注于色谱层析技术,为应对复杂生物大分子样品的纯化,保证填料较高载量的同时,进一步提升填料的耐碱性能,延长填料使用寿命,我们推荐两款具有高耐碱、高回收率的阴离子交换填料,分别为强阴离子交换填料Monomix Mab60-Q以及弱阴离子交换填料Monomix HC60-DEAE Excel。
*强阴离子交换基团为季铵,弱阴离子交换基团二乙氨基
产品介绍
Monomix AEX阴离子交换层析介质均以亲水性聚甲基丙烯酸酯为基质,粒径为60 μm,孔径1000 Å,具有良好的物理化学稳定性。Monomix AEX为触手型阴离子交换层析填料,触手是长线形的聚合物链,携带功能配位体,聚合物链与基质以共价键连接,该构型提供了高比表面积,使生物分子不受空间位阻,与可及的配位体结合。可广泛适用于抗体、疫苗、胰岛素、蛋白、核酸、肝素等生物样品的分离和纯化。
填料性能参数
产品特点
更高的耐碱性——延长使用寿命,降低生产成本
更低工作压力——易于放大,适应大规模制备
高蛋白回收率——高回收率,减少损失
更优pH平衡能力——更高效的操作
高耐碱性-Monomix Mab60-Q
考察Monomix Mab60-Q填料在1 M NaOH中浸泡,样品的保留时间及DBC的变化情况,结果表明1 M NaOH泡碱240 h后,标准蛋白保留时间(表1)未出现明显变化,DBC维持在90%以上(表2)。
表1 Monomix Mab60-Q填料泡碱前、后保留时间变化
表2 Monomix Mab60-Q填料泡碱前、后DBC的变化
高流速-Monomix Mab60-Q
Monomix Mab60-Q离子交换填料在常规线速度下(100~200 cm/h)压力为0.5 bar左右,在1000 cm/h 线速度下压力在2.4 bar左右,操作压力低,有利于放大生产。
图1 Monomix Mab60-Q压力-流速曲线
非特异性吸附低-Monomix Mab60-Q
采用标准牛血清蛋白(BSA)检测填料的非特异性吸附(NSB,图2),BSA标准样品连续上样16次,进样量不变,对样品峰面积进行积分,计算第一针样品与最后一针样品峰面积百分比,结果显示BSA重复上样后比值为97.2%,表现出较低的非特异性吸附。
图2 Monomix Mab60-Q非特异性吸附(NSB)测试峰面积趋势图(BSA)
案例展示-Monomix Mab60-Q
实验考察赛分科技软胶阴离子交换填料Agarosix Q FF填料与硬胶Monomix Mab60-Q对双抗样品中HCP的去除效果(表3),结果显示Monomix Mab60-Q在双抗样品HCP去除实验中蛋白回收率大于97%;HCP去除率及蛋白收率与Agarosix-Q FF相近。
表3 Monomix Mab60-Q与Agarosix Q FF某双抗样品中HCP去除及收率对比
*注:HCP残留检测中标曲从0-100 ng/mL,原样检测到HCP浓度超过线性范围最大值100 ng/mL。
高耐碱性-Monomix HC60-DEAE Excel
考察Monomix HC60-DEAE Excel填料在1 M NaOH中浸泡,样品在填料中保留时间及DBC的变化情况。结果表明1M NaOH泡碱240 h后,标准蛋白保留时间未出现明显变化,DBC维持在85%以上。
表4 Monomix HC60-DEAE Excel填料泡碱前、后保留时间变化
表5 Monomix HC60-DEAE Excel填料泡碱前、后DBC的变化
高流速-Monomix HC60-DEAE Excel
Monomix HC60-DEAE Excel填料在常规线速度下(100~200 cm/h)压力为0.5 bar左右,在1000 cm/h 线速度下压力在2.0 bar左右,操作压力低。
图3 Monomix HC60-DEAE Excel压力-流速曲线
低非特异性吸附-Monomix HC60-DEAE Excel
采用标准牛血清蛋白(BSA)检测填料的非特异性吸附(NSB,图4),BSA重复进样16次,计算第一针与最后一针的峰面积比值为98.6%,结果显示该填料对标准蛋白BSA的非特异性吸附低。
图4 Monomix HC60-DEAE Excel NSB测试峰面积趋势图( BSA )
良好的pH值稳定性- Monomix HC60-DEAE Excel
实验条件:
Column: 0.3421*16.5=5.645 mL
Mobile Phase: A1:0.5M NaOH
A2:10mM Tris+3%蔗糖+1M NaCl
A3:50mM Tris+3%蔗糖
Flow rate:1.129 mL/min
——Cond;—— pH值
图5 Monomix HC60-DEAE Excel填料pH稳定性测试图谱
Monomix HC60-DEAE Excel在高盐切低盐后3-4 CV能达到pH平衡且稳定,可以实现快速、高效操作。
欢迎试用、订购Monomix Mab60-Q & Monomix HC60-DEAE Excel
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