美国药典委员会(USP)拥有200余年历史的药品标准制定经验，在保证上市药品质量标准的同时，引领新型生物制品的研发与创新。通过召集新兴技术领域的行业和科学专家，编纂最佳实验方案，在行业内受到一致认可。

　　病毒载体是目前用于DNA递送的有效机制，可用于基因疗法以及疫苗研发，为促进该技术药物的快速发展，达成质量检测共识，USP近期推出病毒载体疫苗质量控制草案。文中提到采用赛分科技的体积排阻色谱柱SRT SEC-1000联合使用MALS用于检测总的病毒衣壳颗粒。

背景介绍

　　近年来，随着新冠疫情的爆发，多个国家和机构也开发了基于病毒载体的新冠疫苗(如牛津-阿斯利康Vaxzevria，中国康希诺生物 Convidecia等)，在防止新冠疫情的扩散中发挥了重要的作用。全球对此类产品的需求在不断提升，该类产品的质量控制急需完善。

　　病毒载体疫苗本身具有相对复杂的结构，可分为两个部分对其质量进行研究：其一，负责编码激发免疫反应相关蛋白质的DNA；其二，则是病毒载体，而修饰的腺病毒应用最为广泛。每个组分的质量属性和潜在的杂质需要分析，此外还需要评估成品的空壳率，因而制定合适的分析方法是保证质量可靠的关键。

　　另一方面，病毒载体疫苗快速发展，并且成功应用于疾病的预防，加速对其质量控制的需求。如果没有一套共同的方法来确定质量，医药企业必须开发他们自己的内部方法，分散在产品创新上的注意力和资源，质量标准不能达成共识。因而，美国药典委员会搜集相关分析方法并发布此草案，推动病毒载体疫苗产品发展。

文章概述

　　草案介绍了病毒疫苗载体的相关质量检测方法，分为鉴别（DNA序列、病毒衣壳）、效力（转基因表达、病毒滴度）、含量（总病毒衣壳颗粒）、纯度（载体聚体、空壳率、残留宿主DNA）等几个方面。针对不同的质量属性控制指标提出相关的分析方法。这些方法经过USP生物科学专家委员会的审查，将成为行业重要的参考指南和技术资源。现今，为了进一步完善和提高指南中的内容，USP正在征集指南草案的反馈意见，有助于提高病毒载体类疫苗产品质量。意见征集将在2022年7月31日截止，届时该草案方法将正式确认。

　　草案中提到采用体积排阻色谱联合多角度光散射检测器（SEC-MALS）用于含量检测项，具体实验方法如下：

　　磷酸缓冲溶液（2×PBS）：9.0 g氯化钠，1.09 g磷酸氢二钠，0.32 g 磷酸二氢钾，于蒸馏水中溶解并稀释至100 mL

　　溶液A：2×PBS+10%乙醇

　　样品浓度：浓度范围5×10^10~1×10^15 capsids/mL

　　检测模式：液相色谱

　　检测器：UV，260 nm及280 nm；MALS；DRI串联

　　色谱柱：赛分科技 SRT SEC-1000，4.6 mm×300 mm

　　色谱柱温度：25℃

　　样品温度：4℃

　　流速：0.35 mL/min

　　（原文件中为1.0 mL/min，由于该方法参考拜玛琳制药（BioMarin）发表文献方法，经与客户确认流速应为0.35 mL/min，目前正在联系USP进行更正）

　　分析方法：分析时MALS和DRI信号必须归一化，采用“球”模型计算平均摩尔质量及其质量分布，衣壳蛋白和包裹DNA的固有dn/dc值分别为0.185和0.170。

延展阅读

　　赛分科技大孔径色谱柱已广泛应用于腺相关病毒载体（AAV）的检测。此前文献速递栏目中，赛分科技美国客户BioMarin在自然杂志子刊《Scientific Reports》上发表文章，介绍了利用赛分科技SRT SEC-1000体积排阻柱有效分离AAV衣壳单体、聚体及联用MALS测定AAV衣壳及载体基因组，使其成为基因治疗工程中产品开发和过程分析的重要工具。

　　赛分科技客户赛诺菲在《Human Gene Therapy》上发表了文章，利用赛分科技SRT SEC-500开发出双波长检测 (SEC-DW) AAV 样品的完整壳百分比的方法，可作为参考方法。

　　赛分科技客户REGENXBIO在《Journal of Pharmaceutical Sciences》杂志上发表的文章中提到SRT SEC-1000应用于AAV中游离DNA和聚体的检测。

订购信息

*如需了解更多产品信息欢迎联系我们