病毒样颗粒（Virus like particles，VLPs），由于具有安全性高，在结构上与病毒粒子相似，可通过与病毒粒子相同的途径激起免疫系统的有效应答等优点，近二十年来在人用、兽用疫苗及药物递送系统中的应用越来越受到关注。

　　赛分科技客户中国兽医药品监察所和中科院过程所在《生物工程学报》杂志发表文章，文中采用赛分科技体积排阻色谱SRT SEC-500建立病毒样颗粒疫苗及猪圆环病毒2型灭活疫苗的检测方法，并进行方法学验证。

背景介绍

　　疫苗中抗原含量直接影响疫苗的免疫效果。灭活病毒疫苗及VLP 疫苗中的抗原通常具有复杂的颗粒结构。常用的酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)等方法往往难以区分不同颗粒结构的抗原。通过高效体积排阻色谱(high-performance size-exclusion chromatography，HPSEC)和多角度激光散射仪(multi-angle laser light scattering, MALLS)联用可以获取生物样品中的颗粒直径分布、分子质量及分布、颗粒的聚集情况等信息，是对现有的动物实验法和ELISA 方法有力的技术补充。该方法高效便捷、重复性好等优点，已在口蹄疫疫苗的质控中被广泛应用。

　　猪圆环病毒2型(porcine circovirus, PCV2) 是圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属成员，是迄今发现的脊椎动物最小的DNA病毒之一。经研究证明PCV2 能引发多种症状，如断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎和肾病综合征、猪呼吸道疾病综合征等，导致猪群出现大批量死亡，对畜牧业经济造成了严重威胁，疫苗是最为有效防治PCV的措施，对于克制病毒至关重要。现今，PCV2 疫苗产品没有统一的效力评价和相应种类抗原含量的评价方法，因而开发出疫苗检测的准确、通用的方法对于评价现有的疫苗产品质量具有重要意义。

文章概述

　　文章采用赛分科技体积排阻色谱柱SRT SEC-500建立HPSEC-MALLS检测猪圆环病毒2型（PCV2）疫苗抗原检测方法。以纯化的PCV2灭活病毒及VLP为参照，对4家生产企业的2种PCV2灭活病毒疫苗(a、b)及VLP疫苗(c、d)破乳后进行HPSEC-MALLS检测及分子量分析；结合PCV2 抗原检测卡、Western blotting 和透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)，鉴定了特征色谱峰；考察了方法的重复性和检测线性。经初步验证，该方法有望成为一种准确、高效的PCV2疫苗的体外评价方法，用于质量评价与提升。

HPSEC-MALLS检测

　　样品：采用上述色谱条件对破乳后的水相抗原进行检测。

　　流动相：50 mmol/L pH 7.4 磷酸缓冲液，含0.1 mmol/L 硫酸钠；

　　进样体积：100 μL；

　　流速：0.6 mL/min；

　　检测器：UV检测波长280 nm，MALLS检测器（λ=690 nm），示差检测器（RID）依次串联；

　　数据处理：样品相对分子量通过ASTRA 软件(Wyatt Technology, USA)计算获得。

图1 HPSEC-MALLS 检测色谱图

(A)PCV2 灭活病毒参照品 (B)CAP VLP 抗原参照品

图2 HPSEC-MALLS检测PCV2灭活疫苗及VLP 疫苗破乳后的水相抗原分子量分布与色谱图

(A)疫苗a. (B) 疫苗b. (C) 疫苗c. (D) 疫苗d.

图3 HPSEC 检测(A)疫苗d 及(B)Cap VLP 抗原参照品三次重复性检测的色谱图

图4 Cap VLP 纯化抗原中VLP及多聚体的HPSEC检测的峰面积与蛋白浓度的线性相关性

 (A) CapVLP 抗原参照品梯度稀释色谱图。

(B) VLP 及VLP 聚集体的HPSEC 检测峰面积与抗原蛋白浓度的线性回归曲线 

结论

　　文章采用赛分科技SRT SEC-500体积排阻色谱柱建立病毒样颗粒疫苗及PCV2 型灭活疫苗的检测方法。通过HPSEC 可实现快速定量分析PCV2 病毒样颗粒疫苗中的组装体及其聚集体组成，并且方法学验证表明该方法具有很好的重复性和检测线性，有望成为一种准确、高效的PCV2 疫苗的体外评价方法，作为现有方法的补充，在疫苗的质量监管及提升中发挥作用。

订购信息

　　[1] 徐嫄，杨延丽，邹兴启，等．应用高效体积排阻色谱偶联多角度激光散射鉴定猪圆环病毒2 型灭活疫苗及病毒样颗粒疫苗抗原[J/OL]．生物工程学报. https://doi.org/10.13345/j.cjb. 210937