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    • 高结合载量和极好的生物相容性
    • 刚性基质可耐受高压和高流速
    • 高分辨率、高柱效和高回收率
    • 高批间重现性
    • 易于放大
    • 高度亲水性表面,可忽略的非特异性吸附
    • 常规装柱条件下,体积变化小
    • 产品供应能力: 〉100 L

      Monomix IEX离子交换层析介质专为生物样品的分离纯化而设计。其以亲水性聚甲基丙烯酸酯为基质,粒径有15、30 & 60 μm三种规格,粒径分布更均一。其中Monomix MC填料孔径500 Å,为中等载量离子填料。Monomix HC孔径1000 Å,为高载量离子填料,动态载量大于80mg/ml。

      Monomix IEX层析介质具有良好的物理化学稳定性,介质表面经赛分科技特殊处理,具有更好的亲水性,最大程度地避免了与生物类样品的非特异性吸附。并通过专有的表面修饰技术,在亲水性基质表面键合不同的离子交换官能团得到强阳离子交换(SP)、强阴离子交换(Q)、弱阴离子交换(DEAE)三种层析介质,并确保了表面离子交换层的高密度和均一性。Monomix IEX层析介质可广泛适用于抗体、疫苗、胰岛素、蛋白、核酸、肝素等生物样品的分离和纯化。

    介质表面化学组成

    图1. Monomix HC/MC-SP、Q和DEAE介质的表面化学组成示意图

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    图2. Monomix MC30(粒径30μm)的电镜扫描图像。高度均一分散的介质具有很窄的颗粒分布(D90/D10<1.3)

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    图3. Monomix HC30(粒径30μm)的电镜扫描图像。

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    介质技术参数

    表1. Monomix HC-IEX技术参数

    填料类型 Monomix HC-Q Monomix HC-DEAE Monomix HC-SP
    基质 亲水性聚甲基丙烯酸酯
    官能团 -N+(CH3)3 -N(C2H5)2 -SO3H
    粒径大小(μm) 15 30 60 15 30 60 15 30 60
    孔径大小 (Å) 1000 1000 1000
    动态载量*(/mL填料) ≥ 95mg BSA ≥ 90mg BSA ≥ 80mg BSA ≥ 95mg BSA ≥ 90mg BSA ≥ 80mg BSA ≥ 110mg Lysozyme ≥ 90mg Lysozyme ≥ 90mg Lysozyme
    最大线性流速 1000 cm/h
    操作温度 ≤40℃
    pH适用范围 2-12
    操作压力 15μm≤2 Mpa(20 bar);30μm以上≤1Mpa(10 bar)
    流动相兼容性 适用于缓冲盐体系(Tris、磷酸盐、醋酸盐缓冲液等),常规有机相/水体系(乙腈、乙醇等)
    长期保存方法 50% (v/v) ,保存于20%乙醇中
    再生 1-2 M NaCl
    清洗 0.5 M HCl or 0.5-1.0 M NaOH ,强疏水性结合的杂质可用0.1-1%的吐温或Triton X-100清洗

    表2. Monomix MC-IEX技术参数

    填料类型 Monomix MC-Q Monomix MC-DEAE Monomix MC-SP
    基质 亲水性聚甲基丙烯酸酯
    官能团 -N+(CH3)3 -N(C2H5)2 -SO3H
    粒径大小(μm) 15 30   15 30   15 30  
    孔径大小 (Å) 500 500 500
    动态载量*(/mL填料) ≥ 50mg BSA ≥ 40mg BSA   ≥ 50mg BSA ≥ 40mg BSA   ≥ 60mg Lysozyme ≥ 40mg Lysozyme  
    最大线性流速 1000 cm/h
    操作温度 ≤40℃
    pH适用范围 2-12
    操作压力 15μm≤2 Mpa(20 bar);30μm以上≤1Mpa(10 bar)
    流动相兼容性 适用于缓冲盐体系(Tris、磷酸盐、醋酸盐缓冲液等),常规有机相/水体系(乙腈、乙醇等)
    长期保存方法 50% (v/v) ,保存于20%乙醇中
    再生 1-2 M NaCl
    清洗 0.5 M HCl或0.5-1.0 M NaOH ,强疏水性结合的杂质可用0.1-1%的吐温或Triton X-100清洗

     

    表3. Monomix HC-IEX二代产品技术参数

    填料类型 MonomixHC45-5 monomix HC60-Q-Ⅱ MonomlxBR60-SP
    基质 亲水性聚甲基丙烯酸酯
    官能团 -SO3H -N+(CH3)3 -SO3H
    粒径大小(μm) 45 60 60
    孔径大小(Å) 1000 1000 1000
    动态载量*(/mL填料) ≥90 mg Lysozyme ≥80 mg BSA ≥ 80 mg Lysozyme
    最大线性流速 1000 cm/h
    操作温度 ≤ 40℃
    pH适用范围 2-12
    操作压力 ≤ 1 Mpa(10 bar)
    流动相兼容性 适用于缓冲盐体系(Tris、磷酸盐、醋酸盐缓冲液等),常规有机相/水体系(乙腈、乙醇等)
    长期保存方法 50% (v/v) ,保存于20%乙醇中
    再生 1-2 M NaCl
    清洗 0.5 M HCl或0.5-1.0 M NaOH ,强疏水性结合的杂质可用0.1-1%的吐温或Triton X-100清洗

      动态载量(Dynamic Binding Capacity)测试方法: Monomix HC/MC-Q:线性流速为180 cm/h,上样液为含2 mg/mL牛血清蛋白的50 mM Tris缓冲液(pH=8.5)。 Monomix HC/MC-DEAE:线性流速为180 cm/h,上样液为含2 mg/mL牛血清蛋白的20 mM Tris缓冲液(pH=8.0)。 Monomix HC/MC-SP:线性流速为360 cm/h,上样液为含1mg/mL溶菌酶的50 mM磷酸盐缓冲液(pH=6.0)。

    高动态载量

      Monomix IEX层析介质以聚甲基丙烯酸酯微球为基质,在低驻留时间条件下仍然具有很高的动态结合载量。在实际使用过程中, 在同样的柱子尺寸和填料体积下,Monomix IEX可以缩减生物样品生产下游纯化的时间,提高生产效率;在同样的下游纯化的时间内,Monomix IEX可以装更长的柱子(填料体积大),可以批次处理更多的生物样品,从而提高生产效率。

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    图4. Monomix HC30/60-Q、DEAE和SP离子交换层析介质动态载量和驻留时间关系
    a)HC30/60-Q

    填料: Monomix HC-Q (30&60μm, 1000Å)

    柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)

    流动相: 含2 mg/mL牛血清蛋白的50 mM Tris缓冲液(pH8.5)

    流速: 0.5 mL/min (180 cm/h)

    检测器: 280 nm

    检测温度: 室温

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    b)HC30/60-DEAE

    填料: Monomix HC-DEAE (30&60μm, 1000Å)

    柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)

    流动相: 含2 mg/mL牛血清蛋白的20 mM Tris缓冲液(pH8.0)

    流速: 0.5 mL/min (180 cm/h)

    检测器: 280 nm

    检测温度: 室温

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    c)HC30/60-SP

    填料: Monomix HC30-SP & Monomix HC60-SP (30&60μm, 1000Å)

    柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)

    流动相: 含1 mg/mL溶菌酶的50 mM 磷酸盐缓冲液(pH 6.0)

    流速: 1.0 mL/min (360 cm/h)

    检测器: 280 nm

    检测温度: 室温

    更快的操作流速

      相比于传统的琼脂糖基质,采用聚甲基丙烯酸酯基质可以提高填料的耐压性能,能够在更快的流速下实现样品纯化,(或者可以装更长的柱子,可以批次处理更多的生物样品)节省宝贵的时间,提高生产效率。对于不稳定的生物样品(要求快速分离纯化母液),在提高生产效率的同时可以同时提高产品的收率和质量控制。

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    图5. Monomix IEX填料背压与流速的线性关系。由于表面结构的不同,在相同流速下,MC介质能显示出更低的背压

    柱尺寸: 10 mm ID × 150 mm (不锈钢)

    流动相: Monomix HC/MC-Q:50 mM Tris缓冲液(pH 8.0)
    Monomix HC/MC-SP:20 mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)

    超高的耐碱性能

      Monomix IEX 层析介质可在pH2-12之间正常使用,对在线清洗的1.0 M NaOH也显示出良好的耐碱性。如图6所示,以1200个柱体积的1.0 M NaOH进行在线清洗,溶菌酶(Lysozyme)保留时间的变化可以忽略不计。

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    图6. Monomix IEX层析介质耐1.0 M NaOH CIP性能

    填料: Monomix HC30-SP (30μm, 1000Å)

    柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)

    流动相: A: 20 mM磷酸盐缓冲液(pH 6.0)
    B: A+1.0 M NaCl

    梯度: 0-75%B in 10min

    流速: 0.4 mL/min (144 cm/h)

    样品: 1mg/mL溶菌酶(Lysozyme)

    在线清洗: 1.0 M NaOH

    可忽略的非特异性吸附

      Monomix IEX表面含有多个亲水结构域,当用来进行生物分析时,能使其非特异性吸附最小化。如图7和图8所示,无论是Monomix HC30-Q还是SP都对样品(溶菌酶和牛血清蛋白)显示出最小的非特异性吸附。

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    图7. 在Monomix HC30-SP层析柱连续进样牛血清蛋白(BSA)样品18次

    填料: Monomix HC30-SP (30μm, 1000Å)

    柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)

    流动相: 20 mM磷酸盐缓冲液+0.3 M NaCl,pH 7.0

    流速: 0.5 mL/min (180 cm/h)

    进样量: 5 μL

    样品: 1mg/mL牛血清蛋白(BSA)

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    图8. 在Monomix HC30-Q层析柱连续进样溶菌酶(Lysozyme)样品18次

    填料: Monomix HC30-Q (30μm, 1000Å)

    柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)

    流动相: 20 mM磷酸盐缓冲液+0.3 M NaCl,pH 7.0

    流速: 0.5 mL/min (180 cm/h)

    进样量: 5 μL

    样品: 0.5mg/mL溶菌酶(Lysozyme)

    高批间重现性

      Monomix IEX通过严格控制的程序进行生产,因此具有较高的批间重现性。

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    图9.Monomix HC30-SP的批间重现性测试

    填料: Monomix HC30-SP (30μm, 1000Å)

    柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)

    流动相: A: 20 mM磷酸盐缓冲液(pH 6.0)
    B: A+1.0 M NaCl

    流速: 1.0 mL/min (360 cm/h)

    梯度: 0-75%B in 25min

    进样量: 20 μL

    样品: 1)核糖核酸酶A 2)细胞色素C 3)溶菌酶(1mg/mL)

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    图10. Monomix HC30-Q的批间重现性测试

    填料: Monomix HC30-Q (30μm, 1000Å)

    柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)

    流动相: A: 50 mM Tris缓冲液(pH 8.5)
    B: A+0.5 M NaCl

    流速: 1.0 mL/min (360 cm/h)

    梯度: 0-75%B in 25min

    进样量: 20 μL

    样品: 1)卵清蛋白 2)胰蛋白酶抑制剂(1mg/mL)

    易于放大生产

      Monomix IEX层析介质具有易于放大生产的特性。如图11所示,在50x220 mm的柱上实现了三种蛋白质混合物的放大分离,同时具备高分离度和高效率(未显示分析柱的色谱图)。

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    图11. 从小规格分析柱到较大规格制备柱的放大生产

    填料: Monomix HC30-SP (30μm, 1000Å)

    柱尺寸: 50 mm ID × 220 mm FPLC

    流动相: A: 20 mM磷酸盐缓冲液(pH 6.0)
    B: A+1.0 M NaCl

    流速: 20mL/min (61 cm/h)

    梯度: 20%-100%B in 90mi

    进样量: 4 mL

    样品: 1)核糖核酸酶A(5mg) 2)细胞色素C(5mg) 3)溶菌酶(10mg)

    单克隆抗体纯化应用

    1) Monomix HC15-SP

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    图12a. Monomix HC15-SP填料分离纯化单抗样品

    填料: Monomix HC15-SP (30μm, 1000Å)

    柱尺寸: 25 mm ID × 250 mm FPLC

    流动相: A: 10 mM 磷酸盐缓冲液(pH8.0)
    B: A+100 mM NaCl (pH8.0)

    流速: 12.0 mL/min

    检测器: UV 280 nm

    进样量: 0.2 mg mAb/mL resin

    样品: 某单抗(2.4mg/mL)

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    图12b. Monomix HC15-SP填料分离纯化单抗样品的效果

    分析柱: Antibodix WCX-NP5 (5 µm, 4.6 x 250 mm)

    流动相: A: 20 mM 磷酸盐缓冲液 + 50 mM NaCl, pH 6.5
    B: 20 mM 磷酸盐缓冲液 + 90 mM NaCl, pH 6.5

    流速: 0.8 mL/min

    检测器: UV 280 nm

    进样量: 100 µL

    样品: 浓缩后的样品

    单克隆抗体纯化应用

    2) Monomix MC30-SP

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    图13a. Monomix MC30-SP填料分离纯化单抗样品

    填料: Monomix MC30-SP (30μm, 500Å)

    柱尺寸: 6.6 mm ID × 30 mm FPLC

    流动相: A: 50 mM醋酸钠缓冲液(pH5.3)
    B: A+1.0 M NaCl (pH5.3)

    流速: 1 mL/min

    进样量: 3 mL

    样品: 某单抗收集液(11.55mg/mL)

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    图13b. Monomix MC30-SP填料分离纯化单抗样品的效果

    填料: Zenix SEC-300 (3 μm,300 Å, 4.6×300 mm)

    流动相: 150 mM 磷酸盐 (pH 7.0)

    流速: 0.35mL/min

    检测器: UV 280 nm

    进样量: 2 μL

    样品: 洗脱液

    3) Monomix HC30-SP

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    图14a. Monomix HC30-SP填料分离纯化单抗样品

    填料: Monomix HC30-SP (30μm, 1000Å)

    柱尺寸: 6.6 mm ID×30 mm FPLC

    流动相: A: 50 mM醋酸钠缓冲液(pH5.3)
    B: A+1.0 M NaCl (pH5.3)

    流速: 1 mL/min

    进样量: 3 mL

    样品: 某单抗收集液(11.55mg/mL)

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    图14b. Monomix HC30-SP填料分离纯化单抗样品的效果

    分析柱: Zenix SEC-300 (3 μm,300 Å, 4.6×300 mm)

    流动相: 150 mM 磷酸盐 (pH 7.0)

    流速: 0.35mL/min

    检测器: UV 280 nm

    进样量: 2 μL

    样品: 洗脱液

    4) Monomix MC30-DEAE

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    图15a. Monomix MC30-DEAE填料分离纯化单抗样品

    填料: Monomix MC30-DEAE (30μm, 500Å)

    柱尺寸: 6.6 mm ID×150 mm FPLC

    流动相: A: 20 mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)
    B: A+0.5 M NaCl (pH7.0)

    流速: 1.0 mL/min

    进样量: 3 mL

    样品: 某抗体样品(50.9mg/mL)

    5.jpg

    图15b. 图15a所示纯化中收集组分的SDS-PAGE分析

    其中粗品进样量: 30mg抗体/mL resin,SDS-PAGE

    进样量: 粗品 25μg

     

    应用图谱

    产品系列 产品名称 官能团种类 粒径/孔径 订货号
    Monomix HC15 Monomix HC15-Q 强阴离子交换 15μm,1000 Å 280815950
    Monomix HC15-DEAE 弱阴离子交换 280915950
    Monomix HC15-SP 强阳离子交换 280615950
    Monomix MC15 Monomix MC15-Q 强阴离子交换 15μm,500 Å 280415500
    Monomix MC15-DEAE 弱阴离子交换 280515500
    Monomix MC15-SP 强阳离子交换 280215500
    Monomix HC30 Monomix HC30-Q 强阴离子交换 30μm,1000 Å 280830950
    Monomix HC30-DEAE 弱阴离子交换 280930950
    Monomix HC30-SP 强阳离子交换 280630950
    Monomix MC30 Monomix MC30-Q 强阴离子交换 30μm,500 Å 280430500
    Monomix MC30-DEAE 弱阴离子交换 280530500
    Monomix MC30-SP 强阳离子交换 280230500
    Monomix HC45 Monomix HC45-Q 强阴离子交换 45μm,1000 Å 280845950
    Monomix HC45-DEAE 弱阴离子交换 280945950
    Monomix MC30-SP 强阳离子交换 280645950
    Monomix HC45-S 强阳离子交换 284545950
    Monomix HC60 Monomix HC60-Q 强阴离子交换 60μm,1000 Å 280860950
    Monomix HC60-Q-Ⅱ 强阴离子交换 283860950
    Monomix HC60-DEAE 弱阴离子交换 280960950
    Monomix HC60-SP 强阳离子交换 280660950
    Monomix BR60 Monomix BR60-SP 强阳离子交换 60μm,1000 Å 284460950
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