在8月2日，赛分科技联合生物制品圈进行“解密抗体药物纯化工艺“线上直播交流活动。本次直播中，赛分科技Sepax Bioscience技术总监李永福博士对Protein A亲和填料与抗体结合原理、纯化过程中遇到的实际问题以及对于复杂抗体药物的纯化案例等内容进行介绍，针对相应的内容在讨论区进行提问交流，在此我们摘录部分观众的问题，与各位分享。
如果错过8月2日直播现场还可扫描下方二维码，观看直播回放。
精彩回答摘录
1. 赛分科技的Protein A亲和填料和Cytiva有专利冲突吗？
答：赛分科技Protein A亲和填料从基球合成到表面修饰和官能团键合完全自主开发，不会侵犯他人任何知识产权。我们的亲和填料及其制备方法已经获中国发明专利授权，蛋白A配基序列的发明专利也进入到实质性审查阶段。我们从未与其他供应商产生专利冲突，随着赛分科技Protein A亲和填料在生物药项目上的广泛应用，我们也会申请相关佐证材料，以便合作伙伴放心使用。
2. 有供应商说，赛分科技的亲和裸球不是自己合成的，是真的吗？
答：赛分科技核心研发团队位于美国特拉华州，中美两地研发技术人员超200人，汇聚了世界顶尖的色谱科学、材料科学、蛋白工程学领域科学家，以近20年色谱材料研发及产业化的经验积累，构建起完全自主的产品技术平台。赛分科技亲和填料聚合物基球在扬州生产，琼脂糖基球在美国赛分生产，扬州赛分二期工程投产后会转移到扬州生产。
赛分科技以服务客户需求为所有工作的出发点，聚焦于做好自己的产品，2022年，在美国成立了Sepax Bioscience, Inc.，专注高性能层析介质的规模化生产，服务全球生物制药客户。
3. 赛分科技的填料对于中美双报会有什么挑战吗?
答：赛分科技亲和填料是国内第一家通过FDA DMF备案（图1，MF#: 28059）的国产填料供应商，MabPurix A65/A45以及P45亲和填料已经在FDA备案，每年会提供一些更新的材料，这个工作我们在持续跟进。FDA DMF备案申请的流程我们已经熟悉，目前正在积极筹备离子交换填料的申报，大家可以继续期待。如果贵公司在大规模生产阶段，在药品申请阶段有需要提供填料信息的需求，您可以直接联系我们，我们会积极配合。
图1 MabPurix A65/A45以及P45亲和层析介质FDA DMF备案信息（MF#：28059）
4.Protein A是只结合Fc端而不结合Fab的重链吗？
答：从目前已经发表的文献研究看，Protein A结合位点主要在抗体Fc段结构域，并且它实际是在Fc段的CH2和CH3中间区域“elbow”，形象表现为Fc段的胳膊肘位置（图2）。另一方面，Protein A对某些Fab（轻链和重链两个片段）的重链VH会有结合，对抗原结合域没有影响，而是与VH片段中相对保守的氨基酸序列相结合（图2）。
图2. Protein A结合位点示意图
5.对于单抗样品，在试用聚甲基丙烯酸脂亲和填料过程中发现有色素吸附，请问如何避免？如果无法避免，后续处理需要注意哪些问题？
答：对于填料上残留的的色素，碱洗是一个非常有效的方法，采用NaOH溶液可以洗掉色素，如果用NaOH溶液不能完全清洗干净，可以尝试在填料耐受pH范围内，加入一定量的酸进行清洗，特别的情况下需要酸碱交替进行，针对具体情况的清洗条件需要进一步摸索。
6.赛分科技的亲和、离子填料针对多抗样品的纯化有什么优势？
答：对于双抗、多抗等结构复杂的抗体样品，在亲和填料方面硬胶MabPurix P45，可以达到更高的装柱高度，有更好的耐压能力，并且硬胶基质孔是刚性的，孔径1000Å，有效配基更高，对于分子量相对较高的样品也可以保持较高的载量。另外离子交换填料方面，赛分科技有专为抗体药物设计Mab系列产品，阳离子交换有Monomix Mab60-SP，对于多抗的片段、聚体等杂质有很高的分辨率，同时也可以保证较高的载量，阴离子交换有Monomix Mab60-Q，具有良好的耐碱性能，HCP去除方面表现优异。
7.纯化中内毒素怎么控制？
答：内毒素问题是可以在多步控制的，在细胞培养过程中，因为是真核细胞培养，内毒素本来是不应当有的，从现有内毒素检测原理分析，检测内毒素不是检测它的本体，是用一种间接的方式去检测；内毒素的本质是Lipid A，同时带有磷酸基，具有很强的负电荷，外面有很多糖基修饰，在溶液中可以形成小型的聚体，甚至可以达到20 KD，利用内毒素的性质，推荐采用阴离子交换层析非常有效，如果条件合适，甚至一次纯化可以降低1000倍。此外还可采用滤膜的方式也是可以进行尝试的。
8.怎样有效防止在浓缩的时候的样品发生聚集？
答：样品纯化中捕获阶段会浓缩样品，这一操作中需要把握一个平衡点，浓缩的同时，不能让样品浓度太高，因为蛋白分子聚集体形成的可能性会增加；如果有些样品有容易聚集的情况，可以考虑调节pH、加盐、加去垢剂等，但是要特别注意样品在调节的时候样品是否会出现不稳定的状况。通常在药物开发的时候要全面考量，有Lead Candidate，也需要有几个备用的药物分子，因为在纯化之后还有配方、稳定性等未知因素，例如氧化、聚集、脱氨等情况的发生。有些抗体药物产品的浓度可以达到150 mg/ml，要求在4度下可以保存12-18个月，所以纯化之后还有很多工作要做。
本次直播感谢各位观众的热情参与，我们也收获了宝贵的意见，
之后赛分科技会持续推出关于工业纯化和分析色谱的直播内容，敬请期待。
