Proteomix POR-HQ系列:寡核苷酸药物的“精纯担当”
寡核苷酸(Oligonucleotides)药物也称小核酸药物,是短链核苷酸总称,包括反义寡核苷酸(ASO)、小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)、核酸适配体(Aptamer)等。寡核苷酸药物具有研发周期短、特异性强、高效性和长效性等明显性优势,广泛应用于肿瘤、遗传性疾病、心血管疾病、新陈代谢等多个疾病领域。针对寡核苷酸药物下游纯化特点,赛分科技推荐强阴离子交换填料:高分辨率Proteomix POR15-HQ,广适型Proteomix POR30-HQ和低压型Proteomix POR45-HQ,多种粒径满足不同样品需求,助力于寡核苷酸药物纯化。
技术参数
应用案例
某siRNA样品,分别用Proteomix POR15-HQ、进口品牌A、Proteomix POR30-HQ和Proteomix POR45-HQ进行纯化,检测几款不同填料的纯化性能。
样品类型:某siRNA样品
分子量:8 KD
纯度:78.7%
上样载量:10 mg/mL
层析柱:Proteomix POR15-HQ、进口品牌A、Proteomix POR30-HQ和Proteomix POR45-HQ (6.6×100mm,CV=3.42 mL)
图1. Proteomix POR15-HQ与进口品牌A纯化及HPLC分析图谱
相同实验条件下,Proteomix POR15-HQ与进口品牌A的纯化效果相当,洗脱合样纯度分别为95.8%和95.1%,回收率分别为95.7%与93.8%,Proteomix POR15-HQ略佳于品牌A。
图2. Proteomix POR30-HQ纯化及HPLC分析图谱
图3. Proteomix POR45-HQ纯化及HPLC分析图谱
由以上的纯化结果可知,四款填料的洗脱合样纯度都在95%以上,控制单杂含量均小于1%,回收率均高于80%,均达到实际生产需求。Proteomix POR15-HQ与进口品牌A纯化性能一致且略佳;Proteomix POR30-HQ可满足实际应用中的多种样品需求,具有较好的广适性;对于中低压设备、非防爆车间无法使用有机溶剂等情况,推荐使用Proteomix POR45-HQ。
反相层析
阴离子层析通用性强、成本低且分辨率高,通常为寡核苷酸纯化的第一选择,随核苷酸链长逐渐增加,相关杂质的去除难度越大,在阴离子无法满足需求的情况下,可选择保留端基DMT方式,采用反相模式纯化。反相层析具备高分辨率优势,在填料选择上,以高分辨率硅胶反相填料为主,赛分科技推荐C18填料,高载量,高选择性和分离效率,使纯化后的样品纯度及N-X、P=O等关键性指标的控制上满足要求。PolyRP聚合物反相填料因其耐碱性优势也可用于寡核苷酸药物纯化。
表1. C18填料和PolyRP-10-300填料的技术参数
应用案例
图4. Bio-C18纯化某ASO样品纯化图谱
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