近日，赛分（美国）科技有限公司的国际合作伙伴美国REGENXBIO公司的研究人员在《Journal of Pharmaceutical Sciences》杂志上发表了题为《Impact of Time Out of Intended Storage and Freeze-thaw Rates on the Stability of Adeno-associated Virus 8 and 9》的文章*（点击底部左下角“阅读原文”获取文章链接），介绍了AAV腺病毒载体TOIS和冻融率的稳定性考察结果。文章中提到了赛分科技SRT SEC-1000色谱柱应用于分析AAV中游离DNA和聚体的应用案例。

背景介绍

　　腺相关病毒（Adreno-Associated Virus, AAV）载体作为一种基因导入系统，具有安全性好，免疫原性低，能感染分裂细胞和非分裂细胞，能介导基因的长期稳定表达等优点，因此在神经系统的体内和体外研究中，受到越来越多的关注和重视。AAV在基因治疗方面的发展势头越来越大，越来越多的临床试验将其用于各种治疗。

文章概述

　　腺相关病毒（Adreno-Associated Virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成员之一。近年越来越多研究AAV作为基因治疗的载体，AAV 载体包含一条长达 4.7 kb 的 ssDNA，包含在由 60 种单独蛋白质组成的二十面体衣壳中。

　　AAV在制造和储存过程中的化学和物理降解会导致纯度降低和效力丧失。通过设计合理的处方，降低保存温度，可以减小AAV化学和物理产生的降解，AAV可长期贮存于-60℃条件下，短期可置于2~8℃冰箱中。在生产、标记和临床使用过程中会发生冻融 （Freeze-thaw，F/T）循环和暴露于室温和冷藏的情况，需要考察其F/T稳定性。

　　生物技术新锐REGENXBIO公司，就超出预期储存时间（time out of intended storage，TOIS）和冻融率对AAV8和AAV9稳定性的影响进行深入的研究。研究人员设计三个不同处方，将低浓度和高浓度的 AAV8 和 AAV9 暴露在五个F/T循环中，在“daisy chain”中TOIS稳定性研究。考察不同配方下，样品的载体基因组浓度，SEC 峰前含量，DLS 的尺寸分布等指标考察TOIS和冻融率对药物制剂的影响。结果表明，AAV8 和 AAV9产品质量属性保持在可接受的范围内，二者具有适用于制造和临床操作的稳定性曲线，并具有额外的偏移量。

聚体及游离DNA检测

　　聚体及游离DNA检测：文中提到使用粒径为5 μm，孔径为1000 Å的赛分科技SRT SEC-1000分析色谱柱，用于检测游离DNA以及聚体含量。从分析图谱中可以看到样品中的聚体和游离DNA可以实现很好的分离。

　　据了解，REGENXBIO公司多个AAV载体的项目，均采用赛分科技的SEC系列产品进行分析，并定入质量标准。之前的文献速递栏目中，介绍赛分科技客户赛诺菲在《Human Gene Therapy》发表检测AAV样品中全衣壳的方法，其中介绍使用SRT SEC-500作为检测色谱柱，用于确定空衣壳和完整衣壳相对量。

　　* Bee JS, Zhang YZ, Phillippi MK, etc. J Pharm Sci. 2022 Jan 7:S0022-3549(22)00004-1. doi: 10.1016/j.xphs.2022.01.002.

订购信息